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RNA干擾實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2025-07-24
訪(fǎng)問(wèn)量：66
廠商性質(zhì)：其他
一、RNA干擾實(shí)驗(yàn)定義與核心機(jī)制
RNA干擾（RNA interference, RNAi）是一種由雙鏈RNA（dsRNA）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象，通過(guò)特異性降解目標(biāo)mRNA實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)調(diào)控。其核心機(jī)制分為以下步驟：
dsRNA切割
Dicer酶將長(zhǎng)dsRNA或前體miRNA切割為21-23nt的小干擾RNA（siRNA），每條siRNA 3'端有2-3個(gè)突出堿基。RISC復(fù)合物形成
siRNA雙鏈解旋后，反義鏈（引導(dǎo)鏈）與Argonaute蛋白結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RISC）。靶標(biāo)識(shí)別與降解
RISC通過(guò)堿基配對(duì)定位同源mRNA，在距離siRNA 3'端12個(gè)堿基處切割mRNA，導(dǎo)致其降解。
二、RNAi類(lèi)型對(duì)比
| 特征 | siRNA | miRNA |
|---|---|---|
| 來(lái)源 | 外源dsRNA（病毒、人工合成） | 內(nèi)源pri-mRNA加工 |
| 長(zhǎng)度 | 21-23bp | 21-25nt |
| 互補(bǔ)性 | wan全互補(bǔ) | 不wan全互補(bǔ)（3'UTR結(jié)合） |
| 作用機(jī)制 | 切割mRNA | 抑制翻譯或降解mRNA |
| 穩(wěn)定性 | 低（易降解） | 高 |
| 脫靶率 | 較高 | 較低 |
| 導(dǎo)入方式 | 化學(xué)合成、轉(zhuǎn)染 | 表達(dá)載體、病毒導(dǎo)入 |
三、RNA干擾實(shí)驗(yàn)核心應(yīng)用領(lǐng)域
1. 基因功能研究
高通量篩選：利用RNAi文庫(kù)系統(tǒng)性沉默基因，解析基因網(wǎng)絡(luò)。
信號(hào)通路解析：通過(guò)抑制特定基因觀察下游效應(yīng)，如MAPK通路研究。
2. 疾病治療
癌癥治療：靶向KRAS、BRAF等癌基因，抑制腫瘤增殖（臨床試驗(yàn)階段）。
抗病毒療法：抑制HBV、HCV病毒基因表達(dá)（如丙型肝炎病毒核心蛋白抑制研究）。
3. 農(nóng)業(yè)應(yīng)用
抗病蟲(chóng)害作物：通過(guò)沉默害蟲(chóng)關(guān)鍵基因（如Bt棉）提高抗性。
性狀改良：調(diào)控植物激素合成基因，延長(zhǎng)果實(shí)保鮮期。
4. 藥物開(kāi)發(fā)
靶點(diǎn)驗(yàn)證：快速驗(yàn)證新藥靶標(biāo)有效性，如阿爾茨海默病相關(guān)基因篩選。
RNA藥物：Onpattro（siRNA藥物）獲批治療轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性
