一、乙肝動物模型構建實驗動物選擇
1. 常用動物模型及特點
| 模型類型 | 動物 | 優點 | 缺點 | 適用研究 |
|---|---|---|---|---|
| 自然感染模型 | 黑猩猩（Chimpanzee） | 最接jin人類HBV感染 | 倫理限制、成本ji高 | 基礎研究（已基本棄用） |
| 人源化肝臟小鼠 | FRG/FRGN、uPA/SCID、TK-NOG | 支持HBV感染和復制 | 免疫缺陷、需人肝細胞移植 | 藥物評價、病毒生命周期 |
| HBV轉基因小鼠 | HBV-Tg（如1.3HBV-Tg） | 穩定表達HBV抗原 | 不模擬自然感染過程 | 免疫耐受機制研究 |
| AAV-HBV轉導模型 | C57BL/6、BALB/c | 快速建立HBV持續感染 | 非自然感染方式 | 免疫清除機制研究 |
| 鴨/土撥鼠HBV模型 | 鴨（DHBV）、土撥鼠（WHV） | 可模擬部分HBV特征 | 與人HBV存在差異 | 抗病du藥物篩選 |
2. 選擇依據
研究病毒復制 → 人源化小鼠 或 AAV-HBV轉導模型
研究免疫應答 → HBV-Tg小鼠 或 AAV-HBV模型
藥物開發 → 鴨/土撥鼠模型（初篩）→ 人源化小鼠（驗證）
二、乙肝動物模型構建模型構建方法
1. 人源化肝臟小鼠模型（接jin人類HBV感染）
步驟：
選擇免疫缺陷小鼠（如FRG小鼠：Fah?/? Rag2?/? Il2rg?/?）。
移植人肝細胞（原代人肝細胞或HepaRG細胞系）。
HBV感染（靜脈注射臨床HBV分離株，如基因型A-D）。
監測指標：
血清HBsAg、HBeAg（ELISA）
HBV DNA載量（qPCR）
人肝細胞嵌合率（人Albumin檢測）
優缺點：
優點：支持完整HBV生命周期（cccDNA形成、病毒分泌）。
缺點：成本高、需專業移植技術。
2. AAV-HBV轉導模型（快速建立持續感染）
步驟：
選擇AAV血清型（如AAV8，靶向肝臟）。
構建AAV-HBV載體（含1.3倍HBV基因組，如pAAV-HBV1.3）。
尾靜脈注射（劑量：1011–1012 vg/只）。
監測指標：
血清HBsAg（持續6個月以上）
肝內HBV DNA/RNA（qPCR）
優缺點：
優點：操作簡單、成本低。
缺點：非自然感染，無cccDNA形成。
3. HBV轉基因小鼠（研究免疫耐受）
常用品系：
1.3HBV-Tg：完整HBV基因組，高表達HBsAg。
HBV-S-Tg：僅表達HBsAg（模擬慢性攜帶狀態）。
應用：
研究HBV免疫逃逸機制。
評估治療性疫苗（如打破免疫耐受）。
4. 鴨/土撥鼠HBV模型（替代模型）
鴨乙肝模型（DHBV）：
感染方式：靜脈注射DHBV（10?–10?病毒顆粒）。
監測指標：血清DHBsAg、肝內DHBV DNA。
土撥鼠肝炎模型（WHV）：
應用：評估抗病du藥物（如恩替ka韋）。
三、關鍵檢測指標
1. 病毒學指標
血清標志物：
HBsAg、HBeAg（ELISA）
HBV DNA（qPCR，檢測下限<10 IU/mL）
肝內HBV標志物：
cccDNA（Southern blot或特異性qPCR）
HBcAg（免疫組化）
2. 免疫學指標
T細胞應答：
HBV特異性CD8? T細胞（流式檢測MHC多聚體）
IFN-γ ELISPOT（肽段刺激）
體液免疫：
抗-HBs抗體（評價疫苗效果）
3. 病理學分析
肝組織HE染色：炎癥、纖維化。
天狼星紅染色：肝纖維化程度。
四、注意事項
1. 生物安全
HBV操作需在 BSL-2 實驗室進行。
人源化小鼠排泄物可能含HBV，需嚴格管理。
2. 模型局限性
人源化小鼠：缺乏完整免疫系統，難模擬免疫清除期。
AAV-HBV模型：無cccDNA，不能評估靶向cccDNA的藥物。
3. 對照設置
陰性對照：空載體注射或野生型小鼠。
陽性對照：已知抗病du藥物（如替nuo福韋）。
五、應用示例
藥物評價：人源化小鼠中測試 GS-9620（TLR7激動劑） 對HBV的抑制作用。
免疫機制：AAV-HBV模型研究 PD-1抗體 對T細胞功能的恢復作用。
疫苗開發：HBV-Tg小鼠評估 治療性疫苗（如HBsAg-抗體復合物疫苗）。
